常用的定弦法， 是把四条弦由缠弦至子弦固定为A、d、e、a(5 1 2 5 )四个音。即D调。六相二十五品琵琶音域从A到e"'。
一、定弦
(A)定弦的基本方法
琵琶定弦，在传统乐曲中变化较多， 四条空弦之音的音程关系并不固定。但比较常用的定弦法， 是把四条弦由缠弦至子弦固定为A、d、e、a四个音。即D调。 初学者宜先学D调， 定弦是以D调为标准进行定弦。
校定弦音的方法:初学琵琶时， 如对音准观念还未培养与建立，就不会校定弦音。 此时更宜养成定准弦音的习惯。若弦音未定准，就不练习。
在定A、d、e、a的弦音时，可根据笛、箫、口琴、钢琴、音叉等的a音音高，先定好空子弦;然后在第一品位上按子弦弹出e'(比e音高八度)来，作为定空中弦e音的依据;再在第四品上按中弦弹出d'(比d音高八度)来， 作为校定空老弦d音的依据;最后在第一品位上按老弦弹出a 音来(或弹空子弦的a音)，作为校定空缠弦A 音的依据。在初步定好四条弦音之后，应再作校验。 常用的校验方法有下列几种:
(甲)双音校验法:按第一品位子弦与空中弦作"双弹";按第四品中弦与空老弦作双弹; 按第一品老弦与空缠弦作双弹;或"分"空子弦与空缠弦。 如在双弹或分时，发现两条弦音之间有不谐和时， 就需细心去辨别每一条弦的音高，是哪一条弦低了或高了， 将定得不准的弦再作校定。
(乙)泛音校验法:如已学会演奏泛音时， 可用此法
(丙)按音与泛音校验法
(丁)散音与泛音校验法
其中，初学者一般用双音校验法， 但在学到一定程度时，即掌握泛音演奏时，可用泛音校验法， 这是一个比较可靠的好方法。即在排品时， 也宜用泛音来校验，以使品位排粘在准确的位置上。
(B)"变调"定弦的种类
根据演奏乐曲的需要，也可以改动定弦的关系。 在琵琶传统乐曲中，为了更好地发挥某一乐风的特有效果，使其尽量利用空弦，来得到其需要的和弦效果时， 常用改变定弦的方法。如在小工调(即1=D)上作改变定弦时，曾称作"小工变调一"或"小变调二"等。当然，这里所谓的"变调"是指改变了四条空弦之间的音程关系，并不是指改变了乐曲的调式。 现附录在传统乐曲中曾经用过的几种"变调"定弦方法如下:
(A)A、B、e、a:《海青》、《霸王卸甲》等曲用之。
(B)A、B、e、e:浦乐派的《将军令》用之。
(C)E、B、e、e:平湖派的《汉将军令》、《满将军令》用之。
(D)A、e、a、a:无锡派的《将军令》用之。
(E)G、d、e、a:《小普庵咒》用之。
(F)B、d、e、a:《隔雾闻钟》用之。
(G)#F、B、e、a:《舞名马》用之。
(H)A、#c、e、a:荡调弹唱《渔家乐》、 《十二个月》等用之。
(I)#F、d、e、a:《普庵咒》的尾声《清江引》用之。
(C)活动山口
在按平均律半音排列音位的琵琶上，所有的升种调、降种调基本都能按弹。但在某些调上，只能用按音演奏，不能利用四条空弦音。因此，可以试用活动山口。 方法是将活动山口把四条弦身压在第一相、或第二相、 或第三相上。这样，才能在各调上， 根据调式将主音或属音变为空弦音，以便尽量利用各种传统奏法， 发挥其空弦音的作用，在装置有活动山口的琵琶上， 运用了活动山口后，空弦散音都已改变。
二、音域
琵琶上的音位(相与品)， 现都按照平均律依半音顺次排列，一般安装有六相二十五品。 在个别独奏琵琶上出有安装有六相三十品的，在定弦作"Adea "装置有六相二十五品的琵琶上，它的音域是从A到e"';装置有六相三十品的琵琶上，它的音域是从A 到a"'。
三、音色
琵琶由六个相、二十五个品构成了音域宽广的十二平均律。